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細(xì)胞消化的注意事項(xiàng)有什么?

更新時(shí)間:2024-01-28點(diǎn)擊次數(shù):990
  細(xì)胞培養(yǎng)中的消化傳代操作是指將細(xì)胞從當(dāng)前的培養(yǎng)瓶、皿中分離出來,經(jīng)過消化處理后,分散到新的培養(yǎng)瓶、皿中進(jìn)行繼續(xù)培養(yǎng)。那么你知道細(xì)胞消化的注意事項(xiàng)有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、胰蛋白酶的選擇
  EDTA是一種螯合劑,可以與金屬離子結(jié)合。含有EDTA的胰蛋白酶除了具有胰蛋白酶的消化作用外,還具有螯合金屬離子的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)中,含有EDTA的胰蛋白酶,通過螯合細(xì)胞表面的鈣離子,破壞細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附作用,從而使細(xì)胞分離出來。
  因此,如果需要進(jìn)行細(xì)胞解離和分離操作,可以選擇含有EDTA的胰蛋白酶;如果只需要進(jìn)行消化傳代操作,可以選擇不含EDTA的胰蛋白酶。
  二、消化時(shí)間的掌握
  消化時(shí)間的長短會(huì)影響細(xì)胞的生長和狀態(tài)。如果消化時(shí)間過長,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡或者受損;如果消化時(shí)間過短,則可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞未能完q分散,影響細(xì)胞的生長和分化。但細(xì)胞多長時(shí)間能被消化下來,并不完q取決于胰蛋白酶,還和消化的溫度、細(xì)胞的密度、以及消化環(huán)境有關(guān)。
  通常,37°C下進(jìn)行消化可以縮短消化時(shí)間。我們的胰蛋白酶平時(shí)一般放在冰箱內(nèi),在消化操作之前,可以提前拿出。加入胰蛋白酶后,可以把培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化,這樣可以有效縮短消化時(shí)間。另外,不應(yīng)該在細(xì)胞密度太高時(shí)才想起來進(jìn)行消化傳代。當(dāng)密度太高時(shí),細(xì)胞之間的黏連會(huì)加劇,此時(shí)同等的消化條件,會(huì)需要花費(fèi)更多的時(shí)間進(jìn)行消化,進(jìn)一步提高了判斷消化進(jìn)度的難度。比較合理的傳代密度應(yīng)該在70-80%之間。
  三、其他注意事項(xiàng)
  在加入胰蛋白酶之前,通常會(huì)使用pbs進(jìn)行潤洗,潤洗后,應(yīng)該徹d扔棄瓶內(nèi)的pbs后,再加入胰蛋白酶進(jìn)行消化。
  加入胰蛋白酶的量應(yīng)該是剛剛沒過整個(gè)培養(yǎng)瓶底部即可。
  在消化過程中,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞解離太快,可以把培養(yǎng)瓶豎起來,讓瓶壁上殘留的消化液進(jìn)行消化。
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